HiFiScript快速去基因組cDNA*鏈合成試劑盒說明書
HiFiScript Quick gDNA Removal
cDNA Kit
HiFiScript快速去基因組cDNA*鏈合成試劑盒
目錄號：YJ2582
保存條件：-20℃。
規格說明
Cat. No. YJ2582-25 YJ2582-100
Kit Size 25 100
gDNA Eraser 12.5 μl 50 μl
10×gDNA Eraser Buffer 30 μl 120 μl
HiFiScript，200 U/μl 25 μl 100 μl
5×RT Buffer 120 μl 500 μl
Primer Mix 30 μl 120 μl
RNase-Free Water 1 ml 2×1 ml
本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途
產品簡介
本產品是用于去除基因組DNA進行反轉錄的試劑盒。該試劑盒在42℃，2 min即可
除去基因組DNA。同時由于反轉錄試劑中含有抑制gDNA Eraser的組分，經過 gDNA
Eraser處理后的樣品可以直接進行逆轉錄反應合成cDNA。本試劑盒配有新型反轉
錄酶HiFiScript，新穎突變位點大幅提升酶的轉錄活性， cDNA*鏈合成的效率和產
量更高，可利用pg級的總RNA或mRNA合成cDNA*鏈。如逆轉錄產物cDNA用于下
游熒光定量檢測，可在42℃，15min完成逆轉錄反應。本試劑盒適用于*鏈 cDNA的
合成和后續的RT-PCR、RT-qPCR、以及全長cDNA文庫的構建等。
產品特點
1．快速去除基因組：含有去除基因組DNA的gDNA Eraser，只需 2 min即可除去基因
組DNA。
2．快速逆轉錄：15分鐘即可獲得熒光定量PCR模板cDNA*鏈合成。
3．靈敏度高：可利用pg級總RNA或mRNA模板合成cDNA*鏈。
4．的逆轉錄效率：新穎突變位點大幅提升酶活性能，獲得更高產量的cDNA。
注意事項
1．在操作過程中應避免RNase污染，防止RNA降解或實驗中的交叉污染，建議操作人
員帶口罩和一次性手套并經常更換手套，使用專門的儀器和耗材。
2．逆轉錄體系配制在冰上進行操作，防止RNA發生降解。試劑盒的酶使用后盡快置于
-20 oC保存，并盡量避免反復凍融。
3．反應體系可倍比放大，10 μl反應體系可zui大使用1μg總RNA。
4．Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成，也可根據實驗需要選用
Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。
5．若起始RNA的量小于50 ng，建議加入RNA酶抑制劑（RNasin）。本試劑盒并未提
供，如需要可單獨向本公司訂購，貨號為YJ0596。
6．對于二級結構復雜的RNA模板，建議在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5分
鐘立刻置于冰上，短暫離心后進行下一步操作。
操作步驟
將模板RNA在冰上解凍；試劑盒組分在室溫解凍后立刻置于冰上。使用前將每種溶
液渦旋振蕩混勻，并經短暫離心后使用。
一、去除基因組DNA反應
1．根據以下表格在冰上配制反應體系，總體積為10 μl。為了保證反應液配制的準確性，先按反應數+2的量配制預混體系，然后再分裝到每個反應管中，zui后加入RNA樣品。
試劑 10 μl反應體系
10×gDNA Eraser Buffer 1 μl
gDNA Eraser 0.5 μl
RNA Template1） 10 pg-1 μg
RNase-Free Water up to 10 μl
注意：1）如果總RNA量大于1 μg，請按比例擴大反應體系。若起始RNA的量小于50 ng，則建議
加入RNA酶抑制劑（RNasin），該產品貨號為YJ0596。
2．渦旋震蕩混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
3．42℃孵育2分鐘（室溫反應時，可以延長到30分鐘）。
4．反應結束后，短暫離心，置于冰上冷卻。
二、逆轉錄反應
1．根據以下表格在冰上配制反應體系，反應液配制請在冰上進行。為了保證反應液配置的
準確性，先按數+2的量配制成預混溶液，然后再分裝 10 μl到每個反應管中，取配制的預混液10 μl加入至已完成去基因組的步驟1反應管中。
試劑 20 μl反應體系
步驟1反應液 10 μl
HiFiScript，200 U/μl 1 μl
Primer Mix 1） 1 μl
5×RT Buffer 4 μl
RNase-Free Water 4 μl
注意：1） 可根據實驗需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建議20 μl 反應體Oligo-dT Primer 50pmol，或Gene Specific Primer 2 pmol。
1）若下游進行熒光定量PCR檢測，42℃孵育15分鐘，85℃孵育5分鐘。
2）若下游進行普通PCR檢測，42℃孵育30-50分鐘，85℃孵育5分鐘。
注意：對于二級結構復雜或GC含量高的模板，可以提高逆轉錄溫度至50℃，增強逆轉錄效率。
4．反應結束后，短暫離心后置于冰上，再進行后續PCR或熒光定量PCR，如果需要長時
間保存，請置于-20℃。
注意：進行Real-time PCR反應時，逆轉錄產物的加量應不超過PCR反應總體積的1/10。
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